Citometria de flux

La nostra plataforma de citometria de flux proporciona als usuaris equipament d'última generació per a les anàlisis de citometria de flux i la classificació de cèl·lules en alta velocitat. El personal de la unitat dona suport als usuaris en el disseny experimental, l'anàlisi i l'adquisició de dades.
Seguint les instruccions de fabricant, els equips se sotmeten rutinàriament a un manteniment adequat i es duen a terme procediments de control de qualitat estàndard per garantir els millors resultats.

Serveis

Serveis:

Adquisició de mostres a l'analitzador, ja sigui amb suport tècnic o sense, després de rebre una formació adequada.
Classificació cel·lular amb suport tècnic.
Suport per a l'anàlisi de dades si és necessari.

L'objectiu de la Unitat de Citometria és preparar-se i centrar-se en les aplicacions d'interès dels nostres usuaris. Les aplicacions més comuns que s'executen habitualment són:

Classificació cel·lular:

En mode de purificació (quan el més important és obtenir una alta puresa de la població cel·lular d'interès de la mostra original). Fins a 4 poblacions de cèl·lules al mateix temps (classificació de 4 vies).
En mode enriquit (quan el més important és obtenir una alta recuperació de la població cel·lular d'interès de la mostra original). De manera que la puresa es veu lleugerament compromesa. També disponible en classificació de 4 direccions.
En deposició d'una sola cèl·lula (per obtenir una sola cèl·lula o qualsevol nombre desitjat de cèl·lula dins d'un sol pouet utilitzant qualsevol de les plaques estàndard de múltiples orificis).
En mode mixt (el mode de purificació i enriquiment s'executen simultàniament fins i tot per a 2 poblacions de cèl·lules alhora).

Anàlisi:

Caracterització per inmunofenotipado multicolor.
Assaigs de viabilitat.
Assaigs de cicle cel·lular i proliferació.
Expressió gènica (anàlisi de proteïnes fluorescents).
Etc ..

Aparells

La unidad està equipada amb 3 citòmetres de flux de la companyia Beckman Coulter:

1x classificador de cèl·lules d'alta velocitat Moflo-XDP: 4 làsers (B-R-V-Y), 11 colors (5 + 2 + 2 + 2) o (5 + 2 + 4)
Analitzadors 2x Galios: 3 làsers (B-R-V), 10 colors (5 + 3 + 2).

Abreviatures deàser i configuració del banc òptic:

Làsers:
V: violeta, 405 nm; B:blau, 488 nm; Y: groc, 561 nm; R: vermell, 635 nm.

Configuració de banc òptic:
10C [2 + 5 + 3] = 10 colors o detectors PMT en total i [nombre d'ells vinculats a una línia de làser específica).

Publicacions

Bedford-Guaus S, Kim S, Mulero L, Vaquero JM, Morera C, Adan-Milanès R, Veiga A, Raya A. (2016) Molecular markers of putative spermatogonial stem cells in the domestic cat. Reprod Domest Anim Nov6

Pulecio J, Alejo-Valle O, Capellera-Garcia S, Vitaloni M, Rio P, Mejía-Ramírez E, Caserta I, Bueren JA, Flygare J, Raya A. (2016) Direct Conversion of Fibroblasts to Megakaryocyte Progenitors. Cell Rep 17(3):671-683.

Tiscornia G, Lorenzo Vivas E, Matalonga L, Berniakovich I, Barragán Monasterio M, Eguizábal Argaiz C, Gort L, González F, Mellet CO, García Fernández JM, Ribes A, Veiga A, Izpisúa Belmonte JC. (2013) Neuronopathic Gaucher's Disease: induced pluripotent stem cells for disease modelling and testing chaperone activity of small compounds. Hum Mol Genet 22 (4): 633-45. Epub 2012 Oct 31.

Sander V, Suñe G, Jopling C, Morera C, Izpisua Belmonte JC. (2013) Isolation and in vitro culture of primary cardiomyocytes from adult zebrafish hearts. Nat Protoc 8(4): 800-9.

Marti M, Montserrat N, Pardo C, Mulero L, Miquel-Serra L, Rodrigues AM, Andrés Vaquero J, Kuebler B, Morera C, Barrero MJ, Izpisua Belmonte JC. (2013) Mcad-mediated intercellular interactions activate satellite cell division. J Cell Sci 126 (Pt 22):5116-31. Epub 2013 Sep 17.

Barrero MJ, Sese B, Martí M, Izpisúa Belmonte JC. (2013) Macro histone variants are critical for the differentiation of human pluripotent cells. J Biol Chem 288(22):16110-6. Epub 2013 Apr 17.

Montserrat N, de Oñate L, Garreta E, et al. Generation of feeder-free pig induced pluripotent stem cells without Pou5f1. Cell Transplant. 2012;21(5):815-825

Montserrat N, Ramírez-Bajo MJ, Xia Y, et al. Generation of induced pluripotent stem cells from human renal proximal tubular cells with only two transcription factors, OCT4 and SOX2. J Biol Chem. 2012;287(29):24131-24138.

Giorgetti A, Marchetto MC, Li M, et al. Cord blood-derived neuronal cells by ectopic expression of Sox2 and c-Myc. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012;109(31):12556-12561.

Sánchez-Danés A, Consiglio A, Richaud Y, et al. Efficient generation of A9 midbrain dopaminergic neurons by lentiviral delivery of LMX1A in human embryonic stem cells and induced pluripotent stem cells. Hum Gene Ther. 2012;23(1):56-69.

Robles V, Martí M, Izpisua Belmonte JC. Study of pluripotency markers in zebrafish embryos and transient embryonic stem cell cultures. Zebrafish. 2011;8(2):57-63

Eguizabal C, Montserrat N, Vassena R, et al. Complete meiosis from human induced pluripotent stem cells. Stem Cells. 2011;29(8):1186-1195.

Menchón C, Edel MJ, Izpisua Belmonte JC. The cell cycle inhibitor p27Kip¹ controls self-renewal and pluripotency of human embryonic stem cells by regulating the cell cycle, Brachyury and Twist. Cell Cycle. 2011;10(9):1435-1447.

Edel MJ, Menchon C, Vaquero JM, Izpisúa Belmonte JC. (2011) A protocol to assess cell cycle and apoptosis in human and mouse pluripotent cells. Cell Commun Signal 9(1): 8.

Edel MJ, Menchon C, Menendez S, Consiglio A, Raya A, Izpisua Belmonte JC. Rem2 GTPase maintains survival of human embryonic stem cells as well as enhancing reprogramming by regulating p53 and cyclin D1. Genes Dev. 2010;24(6):561-573.

Laso FJ, Almeida J, Torres E, Vaquero JM, Marcos M, Orfao A. (2010) Chronic alcohol consumption is associated with an increased cytotoxic profile of circulating lymphocytes that may be related with the development of liver injury. Alcohol Clin Exp Res 34(5): 876-85.

Raya A, Rodríguez-Pizà I, Guenechea G, et al. Disease-corrected haematopoietic progenitors from Fanconi anaemia induced pluripotent stem cells. Nature. 2009;460(7251):53-59.

Aasen T, Raya A, Barrero MJ, et al. Efficient and rapid generation of induced pluripotent stem cells from human keratinocytes. Nat Biotechnol. 2008;26(11):1276-1284.

Laso FJ, Vaquero JM, Almeida J, Marcos M and Orfao A. (2007) Chronic alcohol consumption is associated with changes in the distribution, immunophenotype, and the inflammatory cytokine secretion profile of circulating dendritic cells. Alcoholism Clinical and Experimental Research 31(5): 846-854.

Laso FJ, Vaquero JM, Almeida J, Marcos M and Orfao A. (2007) Production of inflammatory cytokines by peripheral blood monocytes in chronic alcoholism: Relationship with ethanol intake and liver disease. Cytometry Part B Clinical Cytometry 72(5): 408-15.

Almeida J, Bueno C, Algueró MC, Sánchez ML, Santiago M, Escribano L, Diaz-Agustin B, Vaquero JM, Laso FJ, San Miguel JF, and Orfao A. (2001) Comparative Analysis of the Morphological, Cytochemical, Immunophenotypical, and Functional Characteristics of Normal Human Peripheral Blood Lineage- / CD16+ / HLA-DR+ / CD14-/lo Cells, CD14+ / Monocytes, and CD16- Dendritic Cells. Clinical Immunology 100(3): 325-338.

Bueno C, Almeida J, Algueró MC, Sánchez ML, Vaquero JM, Laso FJ, San Miguel JF, Escribano L, and Orfao A. (2001) Flow Cytometric Analysis of Cytokine Production by Normal Human Peripheral Blood Dendritic Cells and Monocytes: Comparative Analysis of Different Stimuli, Secretion-Blocking Agents and Incubation Periods. Cytometry 46: 33-40.

Bueno C, Almeida J, Algueró MC, Sánchez ML, Cañizo MC, Fernández ME, Vaquero JM, Laso FJ, Escribano L, Díaz-Agustin B, San Miguel JF, y Orfao A. (2000) Caracterización morfológica, histoquímica, fenotípica y funcional de las células dendríticas humanas. Methods Find Exp Clin Pharmacol 22(1): 3-10.

Laso FJ, Vaquero JM, Bueno C, Almeida J, and Orfao A. (2000) Response. Alcoholism: Clinical and Experimental Research 24(2): 241-243.

Almeida J, Bueno C, Algueró MC, Sánchez ML, Cañizo MC, Fernández ME, Vaquero JM, Laso FJ, Escribano L, San Miguel JF, and Orfao A. (1999) Extensive characterization of the imnuphenotype and pattern of citokine production by distinct subpopulations of normal human peripheral blood MHC II+/lineage- cells. Clin Exp Immunol 118: 392-401.

Almeida J, Bueno C, Algueró MC, Sánchez ML, Cañizo MC, Fernández ME, Vaquero JM, Laso FJ, Escribano L, San Miguel JF, y Orfao A. (1999) Subpoblaciones de células dendríticas normales: fenotipo y patrón de secreción de citocinas. Haematologica 84(1): 408-414.

Almeida J, Bueno C, Algueró MC, Sánchez ML, Vaquero JM, San Miguel JF, and Orfao A. (1999) Imnunophenotype and citokine production by normal human peripheral blood dendritic cell subsets. Haematologica vol. 84, EHA-4 Abstract Book: 136.