La t\u00e9cnica de CRISPR est\u00e1 revolucionando la investigaci\u00f3n biom\u00e9dica al permitir editar los genomas con gran precisi\u00f3n. Sin embargo, aunque CRISPR permite generar o corregir mutaciones de uno o de pocos nucle\u00f3tidos con cierta facilidad, todav\u00eda presenta limitaciones a la hora de introducir en el genoma fragmentos de ADN m\u00e1s largos. As\u00ed, por ejemplo, la inserci\u00f3n en el genoma de un gen que produzca una prote\u00edna fluorescente como la GFP, de amplio uso en investigaci\u00f3n, tiene una baja eficiencia y usa pl\u00e1smidos que requieren clonajes complejos.<\/p>\n
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El grupo del Dr Cer\u00f3n ha utilizado el animal modelo Caenorhabditis elegans para optimizar el uso de esta t\u00e9cnica y ha desarrollado el m\u00e9todo Nested CRISPR. Este m\u00e9todo, libre de clonajes, inserta fragmentos largos de ADN en dos pasos. En un primer paso introduce en el genoma una peque\u00f1a porci\u00f3n (menos de 200 nucle\u00f3tidos) del fragmento largo, y esta peque\u00f1a secuencia sirve de \u201cnido\u201d o \u201cplataforma de aterrizaje\u201d para que el fragmento m\u00e1s largo (de una kilobase aproximadamente) se introduzca en el genoma en un segundo paso de una manera eficiente.<\/p>\n
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El trabajo, recientemente publicado en la revista Genetics, de la Sociedad Americana de Gen\u00e9tica, est\u00e1 despertando un inter\u00e9s extraordinario alcanzando la m\u00e1xima puntuaci\u00f3n en los \u00edndices de repercusi\u00f3n de la revista. Animales modelo como C. elegans, con un ciclo de vida corto, permiten a los cient\u00edficos investigar sobre las posibilidades y los l\u00edmites del CRISPR. Este trabajo forma parte de la tesis doctoral de Jeremy Vicencio, que tiene la prestigiosa beca INPhINIT de La Caixa. Tanto Jeremy como las investigadoras predoctorales Carmen Mart\u00ednez y X\u00e8nia Serrat han realizado cientos de microinyecciones en la l\u00ednea germinal de C. elegans y miles de genotipados para demostrar de una manera s\u00f3lida y convincente la eficiencia de la nueva t\u00e9cnica Nested CRISPR.<\/p>\n
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Como mol\u00e9culas reparadoras de ADN, Nested CRISPR usa oligonucle\u00f3tidos comerciales para el primer paso y productos de PCR universales para el segundo. Esto facilita experimentos a gran escala que podr\u00edan etiquetar cientos de genes con prote\u00ednas fluorescentes de inter\u00e9s. Nested CRISPR tambi\u00e9n es modular y a esas prote\u00ednas fluorescentes se les pueden a\u00f1adir otros p\u00e9ptidos u otras prote\u00ednas de inter\u00e9s. As\u00ed, por ejemplo, el grupo est\u00e1 trabajando en el marcaje de estas prote\u00ednas fluorescentes con p\u00e9ptidos que permiten su degradaci\u00f3n de un modo controlado por el investigador.<\/p>\n
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Por \u00faltimo, el grupo de modelos de enfermedad en C. elegans que dirige el Dr Cer\u00f3n pretende usar Nested CRIPSR para reemplazar genes de C. elegans con genes humanos. De este modo, este peque\u00f1o nematodo podr\u00eda servir de modelo multicelular para estudiar el efecto de mutaciones humanas relacionadas con enfermedades. Este sistema tendr\u00eda bastante inter\u00e9s en el campo de la medicina personalizada ya que de una manera r\u00e1pida y eficiente se podr\u00eda tener un pron\u00f3stico sobre la patogenicidad de una mutaci\u00f3n o de una variaci\u00f3n del genoma (conocidas como polimorfismos).
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